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薄層雖小，事兒不少

????????????????????????????——小談薄層檢測注意事項

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薄層色譜法系將供試品溶液點于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與適宜的標準物質(zhì)按同法所得的色譜圖對比，得出鑒別結(jié)果；亦可用薄層色譜儀進行掃描，用于鑒別、檢查或含量測定。

常規(guī)薄層色譜由于具有同板同時可以檢測多個樣品，分析時間短，固定相相對廉價，即用即棄，不用擔心樣品中雜質(zhì)的污染，檢測不受溶劑的干擾，色譜的直觀性強，可同板直觀觀察相互比較。但另一方面，因為它是一種“敞開系統(tǒng)”的色譜技術(shù)，與柱色譜的區(qū)別之一是除材料及器材以外，外界環(huán)境條件對被分離物質(zhì)的色譜行為影響很大，被分離的物質(zhì)色譜行為機制也很復雜；其次是由于分析的全過程是離線多步驟操作,所以操作技巧也明顯的影響色譜質(zhì)量。因而薄層色譜,尤其是常規(guī)薄層色譜,又被視為是一種較難駕馭的技術(shù)。為了充分發(fā)揮薄層色譜技術(shù)在中藥分析方面的優(yōu)勢,提高色譜的分離度和重現(xiàn)性,注意控制影響色譜質(zhì)量的因素是非常重要的。以下從薄層色譜操作過程細說注意點。

1.取樣

大部分供試品使用干凈的粉碎機粉碎即可；烏梅染色等需要整粒取樣；如樣品性狀差異較大，需要獨立取樣，如降香等。

2.點樣

除另有規(guī)定外,在潔凈干燥的環(huán)境中,用專用毛細管或配合相應的半自動、自動點樣儀點樣于薄層板上。一般為圓點狀或窄細的條帶狀,點樣基線距底邊10~15mm,高效板一般基線離底邊8~10mm。圓點狀直徑一般不大于4mm.高效板一般不大于2mm。接觸點樣時注意勿損傷薄層表面。條帶狀寬度一般為5~10mm,高效板條帶寬度一般為4-8mm,可用專用半自動或自動點樣儀噴霧法點樣。點間距離可視斑點擴散情況以相鄰斑點互不干擾為宜,一般不少于8mm,高效板供試品間隔不少于5mm。

雖然鑒別不能也不應等同于定量測定，但在供試品溶液、對照藥材溶液、化學對照品液均定量制備，在薄層板上定量點樣，則樣品得到的色譜不僅可以回答“有沒有”和“是不是”（即真?zhèn)危┑膯栴}，還可以粗略地進行量化評價，在一定程度上提供“優(yōu)劣”的信息。? 因此，點樣時，樣品和對照藥材要盡量按照等量來進行。

3.展開

展開缸日常用的最多的是直立式展開箱，分為平底展開缸和雙槽展開缸。雙槽展開箱具有節(jié)省溶劑、便于預平衡、可控制展開缸內(nèi)相對濕度等優(yōu)點。大多數(shù)中藥樣品適宜用直立式不飽合或部分飽和（展開前使溶劑蒸氣在展開缸內(nèi)擴散平衡一定時間）。

放置過的硅膠薄層板，在使用前需105℃活化處理并放置在干燥器內(nèi)。為了不同實驗室之間及不同季節(jié)均可重現(xiàn)試驗結(jié)果，應盡可能在相對濕度及溫度可控的條件下展開，并記錄實際的相對濕度和溫度。可在雙槽展開缸的一側(cè)槽中加入適當濃度的硫酸來控制濕度：

如需飽和展開，則展開缸內(nèi)壁放同樣大小的濾紙，促使缸內(nèi)盡快達到飽和狀態(tài)。

展開注意事項：①展開劑的配比要準確、經(jīng)濟，展開劑距離原點5mm左右為宜；②部分品種的展開劑較特殊，如取混合溶劑的上層/下層溶液，氨蒸氣飽和等；③一般高沸點的、含酸堿的溶劑展開速度較慢，需要有耐心；④展開距離默認8cm，根據(jù)具體品種可以適當減少或增加，有必要時可以放置冰箱內(nèi)低溫展開，展開劑不可多次重復使用。

4.顯色與檢視

薄層板展開完畢后，大多需要用顯色劑使展開后的斑點顯色，通常使用最多的是噴霧法，噴霧法用的噴霧瓶能在一定壓力下使試劑噴成均勻的細霧狀。觀察薄層色譜用的紫外光燈裝有長波（365nm）和短波段（254 nm）紫外光管兩種。前者用于觀察具有熒光的色譜，后者一般用于觀察硅膠GF254板在熒光背景下的熒光猝滅暗色斑點。

注意事項：①顯色劑配制方法、濃度等要符合藥典要求，每種顯色劑要單獨保存，避免交叉使用同一個噴霧瓶；②噴顯色劑時要均勻，避免出現(xiàn)局部區(qū)域濕透的現(xiàn)象，操作過程注意保護好自己；③薄層板加熱時間要合適，至斑點清晰，薄層板干凈利索。

色譜斑點本身有顏色者,可直接在日光下觀察可見光譜;斑點在紫外光激發(fā)下可發(fā)射熒光者,可直接在紫外光燈下觀察熒光色譜，檢視前注意吹干或烘干溶劑。

市售薄層預制板含羧甲基纖維素鈉，如用硫酸等顯色劑，注意加熱溫度過高或加熱時間過長，容易引起板面的焦化，影響顯色效果，需要特別留意。

以上是本中心在薄層檢測中的經(jīng)驗與注意事項分享，僅供同仁參考。

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